Diálisis

Objetivo

El objetivo de esta parte de la práctica es comprobar que una membrana semipermeable es atravezada por sales y moléculas pequeñas mientras que las proteínas, por su tamaño, quedan en el instrumento que llamaremos dializador.

Materiales y Reactivos utilizados

Los materiales a utilizar en esta práctica son:

• Dializador ( Botella, papel celofán y banda elástica)
• Vaso de Bohemia
• Tubos de ensayo
• Gradilla

Para esta práctica utilizaremos una muestra de 

• Ovoalbúmina, extraída de la clara de huevo
• NaCl, saturado
• Agua destilada

Para identificar sustancias utilizamos

• Nitrato de Plata (AgNO3)
• Reactivos para Biuret ( NaOH y CuSO4)

Fundamento Teórico

La diálisis es el proceso de separar las moléculas en una solución por la diferencia en sus índices de difusión a través de una membrana semipermeable.
Típicamente una solución de varios tipos de moléculas es puesta en un recipiente semipermeable. El dialisador sellado se coloca en un envase con una solución diferente, o agua pura. Las moléculas lo suficientemente pequeñas como para pasar a través de los poros tienden a moverse hacia adentro o hacia afuera del recipiente con la membrana semipermeable en la dirección de la concentración más baja. 

Moléculas más grandes que tiene dimensiones significativamente mayores que el diámetro del poro son retenidas dentro de él.

Un uso común de esta técnica es para quitar la separar la sal de una proteína.

Procedimiento

1. Colocar la clara de huevo con NaCl en un vaso de bohemia, homogeneizar.
2. Colocar agua destilada en un vaso de bohemia de mayor tamaño.
3. Tomar muestras en tubos de ensayo de ambos sistemas y hacer un ensayo de Biuret para cada uno, en busca de proteínas.
4. Registrar los resultados obtenidos
5. Colocar el dialisador en el vaso de bohemia que contiene agua destilada
6. Colocar la mezcla de clara de huevo con NaCl en el dialisador
7. Esperar 10 o 15 minutos sin mover el dialisador
8. Tomar en tubos de ensayo dos muestras de la solución externa al dialisador
9. Hacer en una de ellas un ensayo Biuret
10. En la otra colocar Nitrato de plata para comprobar si el anión cloruro esta presente en ella.
11. Registrar los resultados

El Dializador

El dializador

El dializador se compone de un botella cortada por la mitad con su parte cortada cubierta de papel celofán sostenido por una banda elástica.
Es un instrumento que, dado los poros que posee el celofan, permite pasar solo partículas de hasta cierto tamaño, en este caso, sales, entre otros
El objetivo es que los aniones y cationes del cloruro de sodio atraviesen la membrana mientras que las proteínas no lo hagan.

Los reactivos

Las reacciones químicas recaen en muchas categorías diferentes. La "reacción de doble reemplazo" es un tipo muy común que sucede cuando dos pares de partículas cargadas esencialmente "cambian de socios". El nitrato de plata y el cloruro de sodio rápidamente lo hacen en el agua, produciendo cloruro de plata y la sal nitrato de sodio.

Nitrato de plata

El nitrato de plata es un compuesto iónico, o sal, cuya fórmula es AgNO3. La sal de nitrato de plata consisten en cationes de plata, partículas con carga positiva, que se unen a aniones de nitrato, donde un anión es una partícula con carga negativa. Colectivamente, a los cationes y a los aniones se los llama iones, y todo compuesto que consista de cationes unidos a aniones es un compuesto iónico, o una sal. Todas las sales de nitrato son solubles en agua, independientemente del catión, de manera que el nitrato de plata se disuelve bien en el agua.





Cloruro de sodio

Al igual que el nitrato de plata, el cloruro de sodio es un compuesto iónico. El catión

es sodio y el anión es cloruro, por lo que la fórmula del compuesto es NaCI. Todas las sales de sodio son solubles en agua, entonces el cloruro de sodio se disuelve rápidamente. Es crítico que tanto el cloruro de sodio como el nitrato de plata se disuelvan en agua, porque ambos son sólidos, lo que evitaría que reaccionaran entre sí a través de la reacción de doble reemplazo si no fueran solubles en agua.






Disociación

Cuando el nitrato de plata y el cloruro de sodio se disuelve en agua, los cationes de plata se separan de los aniones del nitrato y los cationes de sodio se separan de los aniones del cloruro. Esto sucede con todos los compuestos iónicos cuando se disuelven en agua y a esto se lo llama disociación. Una vez que los iones se separan unos de los otros, son libres de moverse en forma independiente por el agua y tienen la oportunidad de reaccionar con otros iones que estén presentes.

Reacción

Cuando los cationes de plata se encuentran con aniones de cloruro, forman el cloruro de plata,

 o AgCI, sal iónica. A diferencia del nitrato de plata y del cloruro de sodio, el cloruro de plata no es soluble en agua. Tan pronto como se forma, se "precipita" o sale de la solución. El resultado de mezclar nitrato de plata con cloruro de sodio es la formación inmediata de un sólido blanco que se deposita en el fondo del vaso o contenedor de la reacción. Este es el AgCI. El nitrato de sodio, que es soluble en agua, permanece debajo en el vaso precipitado.






Cloruro de plata

Ensayo de Biuret

 

El ensayo de Biuret lo haremos añadiendo a la muestra de uno de los tubos de ensayo de cada muestra diez gotas de sulfato cúprico (CuSO4) y tres gotas de hidróxido de sodio(NaOH) al 1%.
En en ensayo de biuret, se puede identificar si una muestra presenta proteínas o dos o mas péptidos. En tal caso, la muestra se torna de color violeta. No identifica si una muestra tiene solo aminoácidos porque para que se de la reacción deben haber dos o mas uniones peptídicas.
La reacción consiste en que en medio básico, reaccionen
Cu++ con los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte del enlace peptídico. Allí se forman enlaces coordinados.Se obtiene una coloración azul-violeta de diversos matices cómo el resultado de la formación del complejo 4 aminoácidos unidos por cobre, el cobre le da la coloración. Para que la reacción ocurra deben haber por lo menos dos uniones peptídicas. Esta reacción es una reacción cuantitativa ya que si luego de obtener el color violeta se realiza un análisis espectro fotométrico se puede cuantificar la muestra.

Resultados

Previo a la diálisis: 

En la muestra que contenía la clara de huevo el Biuret fue positivo, por lo que allí habían proteínas.

En la muestra que contenía agua destilada el Biuret dio negativo, por lo que allí no había proteínas inicialmente. 

Agua Destilada               Clara de Huevo

Biuret

Agua destilada                Clara de huevo

Después de la diálisis:

Dentro del agua destilada fue positivo el anión cloruro debido a que precipito cloruro de plata, lo que significa que la membrana era efectivamente semi permeable.

El biuret a la muestra que contenía agua destilada fue negativo lo que significa que las proteínas no lograron atravezar la membrana semipermeable, por lo que cumplimos con nuestro objetivo.

Muestra de agua destilada - ANTES

Reacción con nitrato de plata         Biuret

Precipitado de Cloruro de Plata